蝎毒促增殖肽在大鼠骨髓间充质干细胞上靶蛋白的初步研究

目的研究蝎毒促增殖肽Bmkpp在大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)中的靶点。方法采用Sepha-dex G-50凝胶层析和CM-Sepharose Fast Flow弱阳离子交换层析从东亚钳蝎蝎毒中分离纯化出蝎毒促增殖肽Bmkpp,RP-HPLC检测,酶解-质谱鉴定;提取大鼠BMSCs全蛋白、膜蛋白、胞浆蛋白后上样到Bmkpp亲和层析柱,洗脱收集靶蛋白峰,超滤离心法脱盐浓缩;SDS-PAGE电泳分析洗脱蛋白。结果分离纯化出Bmkpp和其相邻的峰4,RP-HPLC检测分离纯化的Bmkpp纯度达95%。酶解质谱法鉴定其与Bmkpp标准品的主要成分一致。一步亲和层析洗脱峰均为2个,电泳结果显示胞浆洗脱蛋白条带较多,但细胞膜无结合蛋白条带。改变盐浓度分步梯度洗脱全蛋白共得4个峰,1 mol/L NaCl盐浓度分步洗脱全蛋白于13、14、40、260 kD处有4条较明显的电泳条带。结论 Bmkpp在BMSCs上作用于多个靶点并有其特异性的靶标。