表达反义细胞周期蛋白cyclin D1载体对胰腺癌细胞生长和凋亡的影响

目的观察反义细胞周期蛋白ｃｙｃｌｉｎＤ１对胰腺癌细胞生长的影响。方法采用Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ和Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ方法检测了５株人胰腺癌细胞系中ｃｙｃｌｉｎＤ１的扩增及表达情况，发现ＰＣ ７细胞中基因有扩增及过度表达。我们构建了反义（ＡＳ）ｃｙｃｌｉｎＤ１的表达载体，采用ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ转染方法转染ＰＣ ７细胞，获得转化细胞系ＰＣ ７／ＡＳ ｃｙｃｌｉｎＤ１。经Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ、Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测转化细胞系，表明有外源反义ｃｙｃｌｉｎＤ１的表达，而内源性ｃｙｃｌｉｎＤ１ｍＲＮＡ表达及蛋白合成下调，并进行了细胞凋亡分析。结果转化细胞系细胞恶性生物学行为及表型部分逆转，细胞生长速度、ＤＮＡ合成及细胞增殖和代谢能力均明显下降，软琼脂集落形成能力减低。流式细胞术分析发现细胞被阻滞于Ｇ１期，ＤＮＡ凝胶电泳、原位凋亡检测发现凋亡细胞增多。结论通过反义ＲＮＡ技术，下调在细胞周期调控中起重要作用的ｃｙｃｌｉｎＤ１的表达，可使胰腺癌细胞恶性表型部分逆转。