人体肝癌细胞株(7402)的细胞同步化和中期染色体分离方法

用人体肝癌细胞株(7402)和中国地鼠肺细胞系(CH-CL)的细胞建立了同步化方法:7402细胞在指数生长时,加入秋水仙胺处理后,用机械摇晃法收集中期细胞。或者在传代培养的7402细胞中加入TdR的DNA合成抑制剂,培养24小时后更换新的培养液解除细胞的抑制。同上加入秋水仙胺使细胞停止在分裂中期。这两种方法均可获得85～96％的中期细胞。此外,按上述方法加入秋水仙胺处理细胞并结合机械摇晃法,同样可收获70～90％的同步的中期细胞。染色体分离方法:按上述同步化收集的中期细胞,用Hanks液洗涤,TM低渗液处理,离心;去上清液,加入TMS缓冲液与细胞沉淀混匀,转入注射器或研磨器内,吸打或研磨细胞,使细胞膜破裂释放出染色体,再离心,收集上清液,在沉淀中再加入TMS缓冲液,低速离心,再收集上清液。这样反复离心,收集的上清液汇集于大离心管内,再离心,去上清液,加入TMS液混匀,低速离心,收集上清液。如此反复,就可获得纯度高的中期染色体。最后比较了两种同步化方法的优劣,并讨论了分离中期染色体的各种因素。