利用内标为基础的RT-PCR技术检测草莓斑驳病毒

被引：21

作者：

杨洪一

张志宏*

杜国栋

代红艳

高秀岩

机构：

[1] 沈阳农业大学园艺学院

来源：

植物病理学报 | 2005年 / 02期

基金：

教育部留学回国人员科研启动基金;

关键词：

草莓斑驳病毒; RT-PCR; 内标; 检测;

D O I：

10.13926/j.cnki.apps.2005.02.004

中图分类号：

S436.68 [多年生草本果类病虫害];

学科分类号：

摘要：

利用改进的CTAB法提取出优质的草莓总RNA,可以稳定地进行RT PCR。针对草莓斑驳病毒（SMoV）基因组序列设计筛选引物,对病毒基因组的不同区域进行扩增,扩增产物经克隆、测序证明为SMoV的特异片段,与国外序列的同源性为91% 97%。为了监测RNA的质量和RT PCR反应的正常进行,在检测体系中引入线粒体NADH脱氢酶基因ND2亚基作为内标,内标引物跨越内含子区域,只对剪接后的mRNA进行特异扩增,可以较好地监测整个检测过程。在国内首次建立了SMoV的RT PCR检测体系,以优质的草莓总RNA为模板,结合扩增内标的检测体系,对草莓病毒指示植物和草莓栽培品种都可以进行快速稳定的检测。

引用

页码：116 / 122

页数：7

共 18 条

[1] Detection of graft-transmissible diseases in strawberry by a modified leaf grafting technique. Frazier N W. Plant Disease Reporter . 1974
[2] Improved RNA extraction and one-tube RT-PCR assay for simultaneous detection of control plant RNA plus several viruses in plant extracts. Nassuth A,Pollari E,Helmeczy K,et al. Journal of Virology . 2000
[3] Detection of five legume viruses in one sensitive multiplex polymerase chain reaction test. Bariana H S,Shannon A L,Chu P W G. Phytopathology . 1994
[4] 我国草莓斑驳病毒研究鉴定附视频
韦石泉
吴元华
[J]. 植物病理学报, 1994, (04) : 293 - 298
[5] Immunocapture polymerase chain reaction assay and ELISA for the detection of strawberry mild yellow edge associated potexvirus. Kaden-Kreuziger D,Lamprecht S,Martin R R,et al. Acta Horticulturae . 1995
[6] 利用PCR技术检测草莓镶脉病毒
隋春
吴禄平
张志宏
[J]. 园艺学报, 2003, (01) : 82 - 84
[7] PLANT MOLECULAR BIOLOGY
[P].
[8] PLANT MOLECULAR BIOLOGY
[P].
[9] Detection of four apple viruses by multiplex RT-PCR assays with coamplification of plant mRNA as internal control. Menzel W,Jelkmann W,Maiss E. Journal of Virology . 2002
[10] MultiplexRT PCRdetectionoffouraphid bornestrawberryviru sesinFragariaspp. incombinationwithaplantmRNAspecificinternalcontrol. ThompsonJR,WetzelS,KlerksMM etal. JournalofViro logicalMethods . 2003

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