多重PCR在质粒拷贝数检测中的应用

被引：3

作者：

李媛 ^{[1
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任长虹 ^{[1
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吴永红 ^{[1
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叶巧 ^{[1
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石锦平 ^{[1
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屈武斌 ^{[1
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郑晓飞 ^{[1
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刘虎岐 ^{[2
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张成岗 ^{[1
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机构：

[1] 军事医学科学院放射与辐射医学研究所蛋白质组学国家重点实验室

[2] 西北农林科技大学生命科学学院

来源：

中国生物工程杂志 | 2011年 / 31卷 / 06期

关键词：

质粒拷贝数; 多重PCR; 菌液; 实时定量PCR; Southern blot;

D O I：

10.13523/j.cb.20110615

中图分类号：

Q78 [基因工程（遗传工程）];

学科分类号：

071007 ; 0836 ; 090102 ;

摘要：

聚合酶链式反应(PCR)作为常规分子克隆技术已在分子生物学的各个领域得到广泛应用。然而,多重PCR技术应用于质粒拷贝数检测的研究尚未见报道。为深入探索多重PCR在质粒拷贝数测定中的应用,首先利用构建的多重PCR引物设计及评估体系分别针对细菌基因组DNA和质粒载体DNA序列设计多重PCR引物;然后以转化有不同质粒载体的大肠杆菌菌液为模板进行多重PCR反应;最后利用凝胶成像仪采集图像后进行积分光密度分析以获得质粒的相对拷贝数。结果显示通过多重PCR得到的质粒相对拷贝数与Real-time PCR和Southern blot的检测结果基本一致,说明多重PCR可用于质粒拷贝数的定性检测。利用多重PCR技术建立了一种便捷的质粒拷贝数检测方法,为在宿主细胞中快速确定克隆载体或表达载体的相对含量提供了参考。

引用

页码：93 / 98

页数：6

共 17 条

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