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欧芹苯丙氨酸脱氨酶cDNA在乳酸乳球菌中的表达研究
被引：6
作者：
向华
刘敬忠
胡维
祝锦
朱章菱
机构：
[1] 首都医科大学附属北京红十字朝阳医院
[2] 中国科学院微生物所微生物分子遗传室
来源：
基金：
北京市自然科学基金;
关键词：
苯丙氨酸脱氨酶基因，乳酸乳球菌，基因表达，苯丙酮尿症;
D O I：
10.13343/j.cnki.wsxb.1999.03.002
中图分类号：
学科分类号：
摘要：
将欧芹（Ｐｅｔｒｏｓｅｌｉｎｕｍｃｒｉｓｐｕｍ）苯丙氨酸脱氨酶（ＰＡＬ）ｃＤＮＡ亚克隆到组成型表达载体ｐＭＧ３６ｅ启动子Ｐ３２下游，电穿孔法转化乳酸乳球菌，获得有ＰＡＬ表达活性的乳酸乳球菌工程菌（ｐＭＧ３６ｅＰＡＬ／Ｌ．ｌａｃｔｉｓＭＧ１３６３）。通过递归ＰＣＲ合成了一段１２０ｂｐ的调控片段，用以将ｐＭＧ３６ｅ改造为分泌型表达载体ｐＸＨＳ，以翻译偶联的方式表达ＰＡＬ，可使ＰＡＬ的Ｎ末端带上ｕｓｐ４５信号肽，结果亦检测到ＰＡＬ酶活性。自行分离克隆了乳酸乳球菌热休克蛋白基因ｄｎａＪ的启动子区域，构建了热诱导表达载体ｐＸＨＪ，获得ＰＡＬ热诱导表达工程菌（ｐＸＨＪ ＰＡＬ／Ｌ．ｌａｃｔｉｓＩＬ１４０３），经３０℃至３７℃热诱导，可使ＰＡＬ表达活性提高至２倍。本文还就乳酸乳球菌ＰＡＬ工程菌在经典型苯丙酮尿症防治中的应用进行了分析和讨论
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