RAW264.7巨噬细胞的扫描电镜样品制备与观察

目的探索贴壁细胞扫描电镜样本最佳制备方法及仪器工作参数调节与图像质量之间的关系。方法通过对样品制备中清洗、脱水、镀膜步骤的对比试验,调整样品处理的次数、时间、样品台距离、喷涂厚度,获得最佳制备条件;优化电镜加速电压、物镜光阑、工作距离,得到最佳工作参数。结果制备RAW 264.7巨噬细胞扫描电镜样品的最佳方法是用0.1 mol/L PBS清洗2次,每次5 m in;30%、50%、70%、90%、100%乙醇梯度脱水,每次3 m in;镀膜导电时靶与样品之间距离为5 cm,真空度1.33～13.33 Pa,电流10 mA,时间150 s,间断镀膜。观察样品时最佳工作参数设置为加速电压10 kV,物镜活动光阑孔50μm,工作距离12 mm。结论制备样品程序中清洗、脱水、镀膜条件的设定及仪器的加速电压、物镜光阑孔大小、工作距离的优化,有利于获得清晰、细节丰富、反差适中、立体感强的扫描电镜图像。