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导入外源DNA的大豆根瘤菌22-10基因工程菌株的构建与分析
被引：4
作者：
缪礼鸿
周俊初
机构：
[1] 华中农业大学生物技术中心
[2] 华中农业大学生物技术中心 武汉
[3] 武汉
来源：
关键词：
大豆根瘤菌;
转移接合子;
质粒;
D O I：
10.13300/j.cnki.hnlkxb.1993.03.011
中图分类号：
Q785 [转化及克隆];
学科分类号：
071007 ;
0836 ;
090102 ;
摘要：
通过三亲本杂交,分别将紫云英根瘤菌7635R的基因文库和慢生型大豆根瘤菌22-10的基因文库引入到慢生型大豆根瘤菌22-10中,获得了大量的含有外源DNA片段的转移接合子。以结瘤试验作选择标准,从中筛选到3株具有较高固氮效率的基因工程菌株HN5-1、HN5-2和HN22-2。采用反向杂交,将接合子HN5-2中的外源重组质粒转回到大肠杆菌中,提取质粒作EcoRI酶切。表明pLAFR1质粒载体上携带有大约20 kb大小的DNA片段。实验还证明,在含有从根瘤菌转移而来的pLAFR1质粒的大肠杆菌细胞中,常伴随有辅助性质粒pRK2013的存在,用四环素和卡那霉素两种选择性抗性可淘汰其中的pRK2013质粒而仅保留有来自根瘤菌的pLAFR1重组质粒。
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页数：10
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