蛇毒cystatin基因合成及其在大肠杆菌的表达

目的　研究蛇毒 cystatin基因的合成并在大肠杆菌系统内表达。　方法　根据中华眼镜蛇毒 cystatin蛋白的氨基酸序列合成 cystatin基因的 4个片段 ,通过缓慢退火 PCR方法将其拼接为完整的 cystatin基因 ,经Bam H 及 Sac 双酶切后定向克隆到原核表达载体 p ET- 4 2 a(+)中 ,PCR及测序鉴定 ,转化宿主菌 BL 2 1 (DE3) ,异丙基硫代 -β- D半乳糖苷 (IPTG)诱导 ,SDS- PAGE凝胶电泳分析表达产物 ,GST· Mag琼脂糖树脂纯化融合蛋白 ,Western- blot鉴定。　结果　成功合成蛇毒 cystatin基因 ,并构建原核表达质粒 p ET- 4 2 a(+) /GST- cystatin,在大肠杆菌 BL 2 1 (DE3)中表达融合蛋白 GST- cystatin,SDS- PAGE凝胶浓度扫描显示表达量占菌体总蛋白的 30 % ,Western- blot证实纯化蛋白为重组 cystatin蛋白。　结论　合成蛇毒 cystatin基因并在大肠杆菌中表达 ,为进一步研究其生物学活性及抗肿瘤转移功能奠定基础