副溶血性弧菌耐热直接溶血毒素基因的克隆

被引：8

作者：

吴振龙

聂军

鲍慧宁

徐兵

王红

机构：

[1] 第一军医大学流行病学教研室!广东广州,第一军医大学流行病学教研室!广东广州,安徽省铜陵市人民医院!安徽铜陵,军事医学科学院生物工程研究所!北京,第一军医大学流行病学教研室!广东广州

来源：

第一军医大学学报 | 2001年 / 02期

关键词：

副溶血性弧菌; 直接溶血毒素; 大肠杆菌;

D O I：

暂无

中图分类号：

R394.8 [医学遗传工程];

学科分类号：

0831 ;

摘要：

目的探讨克隆副溶血性弧菌（Ｖｐ）耐热直接溶血毒素基因的方法。方法用ＰＣＲ技术扩增目的基因，双酶切载体ｐＵＣ１９和目的基因ＤＮＡ，连接并转化大肠杆菌ＪＭ１０９。对重组质粒进行ＰＣＲ鉴定、酶切鉴定和序列分析。结果凝胶电泳显示，标准株Ｖｐｌ４－９０基因组ＤＮＡ的ＰＣＲ产物长约６００ｂｐ。阳性克隆的ＰＣＲ产物也为一长约６００ｂｐ）的条带，经双酶切可切出一约６００ｂｐ的条带。ＤＮＡ测序结果表明与Ｇｅｎｅｂａｎｋ中的序列有９９．６５％的同源性。结论利用该方法成功克隆了目的基因，为制备用于现场检测的基因探针和Ｖｐ的保护性菌苗以及阐明Ｖｐ的致病机理奠定了基础。

引用

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