果树组织中总RNA提取的新方法

被引:49
作者
侯义龙
张开春
吴禄平
胡文玉
林珂
冯晓元
邢福有
机构
[1] 中国科学院沈阳应用生态研究所
[2] 北京市林业果树研究所
[3] 沈阳农业大学
[4] 大连大学生物工程学院
关键词
果树组织; 逆转录; 聚合酶链式反应;
D O I
暂无
中图分类号
Q943 [植物细胞遗传学];
学科分类号
071007 ; 090102 ;
摘要
本研究设计了一种新的RNA提取方法 ,解决了RNA提取时容易被降解和污染这一关键问题。通过加入Rnase抑制剂 ,消除了同外源RNase对RNA的降解 ,结合DNA难呈低盐溶液(140mmol·L -1NaCl)的原理 ,去除了DNA对RNA提取液的污染 ;先后使用酚和氯仿 ,有效地去除了蛋白质和酚类物的污染 ,利用抗氧化剂PVP和巯基乙醇 ,消除了内源酚类物质氧化变色对病毒RNA逆转录的影响。采用上述方法可以在4~5h内得到纯度高、含量大、完整性好的果树总RNA ,并获得了逆转录活性较强的病毒RNA ,同时使提取RNA的成本降低。这些方法对苹果、葡萄、桃、樱桃等果树总RNA的提取均适用。
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