果树组织中总RNA提取的新方法

被引：49

作者：

侯义龙

张开春

吴禄平

胡文玉

林珂

冯晓元

邢福有

机构：

[1] 中国科学院沈阳应用生态研究所

[2] 北京市林业果树研究所

[3] 沈阳农业大学

[4] 大连大学生物工程学院

来源：

沈阳农业大学学报 | 2002年 / 02期

关键词：

果树组织; 逆转录; 聚合酶链式反应;

D O I：

暂无

中图分类号：

Q943 [植物细胞遗传学];

学科分类号：

071007 ; 090102 ;

摘要：

本研究设计了一种新的RNA提取方法 ,解决了RNA提取时容易被降解和污染这一关键问题。通过加入Rnase抑制剂 ,消除了同外源RNase对RNA的降解 ,结合DNA难呈低盐溶液(140mmol·L -1NaCl)的原理 ,去除了DNA对RNA提取液的污染 ;先后使用酚和氯仿 ,有效地去除了蛋白质和酚类物的污染 ,利用抗氧化剂PVP和巯基乙醇 ,消除了内源酚类物质氧化变色对病毒RNA逆转录的影响。采用上述方法可以在4～5h内得到纯度高、含量大、完整性好的果树总RNA ,并获得了逆转录活性较强的病毒RNA ,同时使提取RNA的成本降低。这些方法对苹果、葡萄、桃、樱桃等果树总RNA的提取均适用。

引用

页码：122 / 125

页数：4

共 8 条

[1] A rapid simple method for preparation of RNA from yeast. Smish N R. Nucleic Acids Research . 1998
[2] 生物化学[M]. 高等教育出版社 , 沈同等编著, 1980
[3] 分子克隆实验指南[M]. 科学出版社 , (美)J.萨姆布鲁克(J.Sambrook)等著, 1992
[4] The coat proteins and putative movement proteins of isolates of Prunus necrotic ringspot virus from different host species and geographic origins are extensively conserved
Scott, SW
Zimmerman, MT
Ge, X
MacKenzie, DJ
[J]. EUROPEAN JOURNAL OF PLANT PATHOLOGY, 1998, 104 (02) : 155 - 161
[5] 现代分子生物学实验技术[M]. 中国协和医科大学出版社 , 卢圣栋主编, 1999
[6] 富含多糖猕猴桃果实组织中总RNA提取方法的改进
陈昆松
徐昌杰
张上隆
GavinS．Ross
[J]. 植物生理学通讯, 1998, (05) : 371 - 373
[7] Sensitive detection of apple chlorotic leaf spot virus from infected apple or peach tissue ussing RT-PCR, ICRT-PCR, or multiplex IC-RT-PCR. Nemchinov L. Acta Horticulturae . 1995
[8] Detection of tobacco rattle virus by RT-PCR. Langeveld N. Journal of General Virology . 1995

← 1 →