NADPH氧化酶在转化生长因子β1诱导大鼠肾小管上皮细胞转分化中的作用

目的探讨NADPH氧化酶在转化生长因子β1(TGF-β1)诱导大鼠肾小管上皮细胞(NRK-52E)转分化中的作用。方法用TGF-β1(10μg/L)刺激NRK-52E细胞不同时间,观察α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、纤溶酶原激活物抑制剂1(PAI- 1)及Ⅰ型胶原(Col-Ⅰ)的表达。部分实验中细胞在TGF-β1刺激前用NADPH氧化酶抑制剂DPI预处理1 h。用激光共聚焦显微镜观察细胞内活性氧(ROS)的产生。用RT-PCR方法检测NADPH氧化酶p22phox、gp91phox、p47phox和p67phox亚单位mRNA的表达。α-SMA、E-cadherin、PAI-1及Col-ⅠmRNA及蛋白的表达分别采用RT-PCR、Western印迹和细胞免疫化学检测。结果TGF-β1可显著上调NADPH氧化酶p67phox亚单位mRNA的表达,8 h及24 h时分别为对照组的2.43倍及3.59倍(P<0.01)。TGF-β1可显著促进细胞ROS的产生,5 min时已是对照组的2.5倍(P<0.05)。DPI预处理同时可显著逆转TGF-β1诱导NRK-52E细胞ROS的产生(P<0.05)、α-SMA的表达上调、E-cadherin的表达下调以及PAI-1和Col-Ⅰ的表达上调。结论TGF-β1可促进NRK-52E细胞增加ROS的产生。ROS介导了TGF-β1诱导NRK-52E细胞的转分化,促进肾脏纤维化。