龙眼SCoT-PCR反应体系的优化

被引：74

作者：

陈虎 ^{[1
]}

何新华 ^{[1
,2
]}

罗聪 ^{[1
]}

高美萍 ^{[1
]}

朱建华 ^{[2
]}

机构：

[1] 广西大学农学院

[2] 广西作物遗传改良与生物技术重点实验室

来源：

基因组学与应用生物学 | 2009年 / 28卷 / 05期

关键词：

龙眼; SCoT; PCR体系优化;

D O I：

暂无

中图分类号：

S667.2 [龙眼（桂圆）];

学科分类号：

090201 [果树学];

摘要：

目标起始密码子多态(start condon tardeted polymorphism,SCoT)分子标记结合了ISSR标记和RAPD标记的优点,具有操作简单﹑成本低廉﹑多态性丰富﹑重复性好﹑引物设计简单且通用性良好等诸多优点。本实验以石硖龙眼的新鲜叶片为试材,采用单因素试验的方法分别研究模版、引物、rTaqDNA聚合酶、dNTPs、缓冲液(Mg2+)及退火温度共6因素各8个水平对龙眼SCoT-PCR扩增结果的影响。结果表明:龙眼SCoT标记的20μL优化反应体系为:10×BufferⅡ(含Mg2+)2.0μL、DNA模板30ng、引物浓度为30μmol/L、rTaqD-NA聚合酶用量为0.45U、dNTP浓度为4.0mmol/L。适宜的扩增程序为:94℃预变性4min;95℃变性50s,49.5℃退火40s,72℃复性2min,36个循环;最后72℃延伸10min。利用24个龙眼品种验证该反应体系,1.5%琼脂糖电泳检测结果显示,扩增产物在400～2200bp之间,不同品种间DNA谱带具有多态性,反应体系具有良好的稳定性和可重复性。

引用

页码：970 / 974

页数：5

共 4 条

[1]

福建主栽龙眼品种的类群分类初探 [J].