伪狂犬病毒gG基因的表达及gG-LAT诊断方法的建立

被引：11

作者：

唐勇

陈焕春

覃雅丽

何启盖

肖少波

不详

机构：

[1] 华中农业大学畜牧兽医学院

[2] 华中农业大学畜牧兽医学院武汉

[3] 武汉

来源：

畜牧兽医学报 | 2003年 / 01期

基金：

国家科技攻关计划;

关键词：

PRV; gG基因表达; 大肠杆菌; gG-ELISA; gG-LAT;

D O I：

暂无

中图分类号：

S852.65 [家畜病毒学];

学科分类号：

090601 ;

摘要：

依据伪狂犬病病毒(PseudorabiesVirusPRV)Rice株序列合成针对gG基因的特异性引物,从PRV鄂A株中扩增出gG基因,并将其克隆到pBluescriptⅡSK+质粒中并测序,用SacⅠ和HindⅢ酶切,将gG基因融合到pET 28a质粒中T7启动子下游,构建成原核表达质粒pET 28a gG1,结果并未获得表达。再用NotⅠ切除gG基因后小半部分片段,构建成原核表达质粒pET 28a gG2,使其在E.coliBL21(DE3)中以IPTG诱导表达,经SDS PAGE分析,表达特异带为47KDa,斑点杂交证实表达产物具有抗原性。表达产物主要以可溶性蛋白的形式存在于细菌裂解液的上清之中,上清经饱和硫酸铵溶液沉淀,透析,PEG20000浓缩,ELISA分析表明,经初步纯化的表达产物可与抗PRV猪血清发生特异性免疫反应。用该产物致敏空白乳胶建立gG 乳胶凝集试验(gG LAT),检测340份血清,结果表明gG LAT能区分gG基因缺失疫苗活苗免疫猪与自然感染野毒的血清学阳性猪,且特异性强、敏感性高。

引用

页码：72 / 76

页数：5

共 6 条

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杜勇 ;

徐静 ;

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王海涛 .

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[2] 乳胶凝集试验检测猪伪狂犬病血清抗体的研究 [J].

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陈焕春 ;

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黄冬生 .

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