引物长度不对称PCR技术制备单链DNA探针

被引：5

作者：

彭晓谋

顾琳

陈雪娟

黄仰甦

高志良

机构：

[1] 中山大学附属第三医院传染病科

来源：

中国实验诊断学 | 2002年 / 04期

关键词：

聚合酶链反应; 单链DNA; 斑点杂交;

D O I：

暂无

中图分类号：

R346 [];

学科分类号：

摘要：

目的　建立引物长度不对称PCR制备单链DNA探针技术 ,评价单链探针进行斑点杂交的优越性。方法　设计 1对引物 ,其中 1条引物长度为 34bp ,复性温度为 75 2℃ ,另 1条为 2 0bp ,复性温度为 5 5 7℃。首先以 5 2℃的复性温度进行双向对数扩增 ,获得一定数量的双链DNA ,再以 72℃的复性温度进行单向扩增 ,获得单链DNA片段。以含HBVS基因片段的质粒为模板 ,在PCR体系中加入地高辛标记核苷酸直接制备探针 ,并收集 4 0份乙型肝炎患者的血清进行斑点杂交检测。结果　采用引物长度不对称PCR可成功地制备出单链探针且重复性好。对 4 0份乙型肝炎患者血清进行斑点杂交检测 ,HBVDNA检出率为 4 0 %。双链探针和单链探针的检出率一样 ,但单链探针的斑点更清晰 ,背景更好。结论　引物长度不对称PCR可能成为制备单链DNA片段或探针的简便而有效方法。单链探针具有高效和简便特点 ,有广阔的应用前景

引用

页码：206 / 208

页数：3

共 7 条

[1] A simple method of detecting amplified DNA with immobilized probes on microtiter wells. Kawai S,Maekawajiri S,Yamane A. Analytical Biochemistry . 1993
[2] Synthesis of PCR-derived,single-stranded DNA probes suitable for in situ hybridization. Hannon K,Johnstone E,Craft LS,et al. Analytical Biochemistry . 1993
[3] Use of the asymmetric polymerase chain reaction and DNA sequencing to determine genetic variability of bean golden mosaic geminivirus in the Dominican Republic. Gilbertson RL,Rojas MR,Russell DR,et al. Journal of General Virology . 1991
[4] Generation of high efficiency ssDNA hybridization probes by linear polymerase chain reaction (LPCR). Konat GW. Scanning Microsc Suppl . 1996
[5] Comparison of different methods to produce single-strand DNA for identification of canned tuna by single- strand conformation polymorphism analysis. Rehbein H,Mackie IM,Pryde S,et al. Electrophoresis . 1998
[6] Rapid preparation of single stranded DNA from PCR products by streptavidin induced electrophoretic mobility shift. Pagratis NC. Nucleic Acids Research . 1996
[7] PCR-derived ssDNA probes for fluorescent in situ hybridization to HIV-1 RNA. Knuchel MC,Graf B,Schlaepfer E,et al. Journal of Histochemistry and Cytochemistry . 2000

← 1 →