用半套式PCR检测犬瘟热病毒的研究

根据GenBanK中Barrett报道的犬瘟热病毒Onderstepoort弱毒株的附着或血凝蛋白基因序列，设计合成了能扩增760bp基因片段的半套式引物。用异硫氰酸胍—酚—仿一步抽取法提取细胞总RNA进行反转录，再以此产物进行半套式PCR扩增，并筛选出最佳PCR扩增。结果经半套式PCR扩增能得到与设计片段大小相同的产物，并且不扩增犬细小病毒、犬腺病毒、犬冠状病毒、狂犬病病毒的核酸。敏感性试验表明，此法能扩增出CDV强毒细胞培养物（毒价为10－5.8TCID50／0．1mL）10－6稀释的反转录产物，远高于常规PCR。经初步应用表明，此法可用于天瘟热的临床诊断和实验研究。