丹参诱导骨髓间充质干细胞分化为神经样细胞的突触功能研究

目的探讨由丹参诱导骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)定向分化的神经细胞是否具有突触循环功能。方法采用优化诱导方案对4～5代状态好的MSCs进行反复多次诱导,终止诱导后分别进行免疫荧光细胞化学、细胞内钙离子流及突触功能检测。以50 mmol/L KCl作为诱发动作电位的刺激因子,采用激光共聚焦显微镜(LSCM)对Fluo-3/AM和SynaptoRed C-2荧光探针进行荧光激发,检测分化神经细胞在细胞外高钾刺激下细胞内钙流及细胞突触功能。结果4次诱导5 h后,神经样细胞伸出突起并交互成复杂网状;免疫荧光细胞化学显示4次诱导5 h后TUJ-1表达率为(96.7±2.8)%,突触小泡蛋白(synaptophysin)表达率为(96.2±2.1)%;LSCM显示4次诱导5 h后细胞在高钾刺激下细胞内钙流增加,细胞突触发生胞吞胞吐。结论丹参可高效快速诱导MSCs分化为神经细胞,此细胞具有正常的突触循环功能。