应用点免疫结合法和组织印迹法检测烟草组织中的TMV和CMV

报道了应用酶联免疫测定法中的点免疫结合法 (Dot immunoblots ,Dot ELISA)和组织印迹法(Tissueblots ELISA)检测烟草组织中烟草花叶病毒 (TMV)和黄瓜花叶病毒 (CMV)的方法及效果。Dot ELISA检测提纯TMV ,兔抗TMV血清稀释 10 0 0倍 ,最低检出率可达 1.2 5ng/ml;检测TMV病叶汁液 ,最低检出稀释度为 1∶2 560。检测CMV病叶汁液 ,兔抗CMV血清稀释 50 0倍 ,最低检出稀释度为 1∶2 560。Dot ELISA检测低稀释度健康烟叶粗汁液时存在假阳性 ,提高稀释度可消除假阳性。应用Dot ELISA ,选择反应强度高、健康烟叶粗汁液无假阳性的抗血清稀释 10 0 0倍 (TMV)、50 0倍 (CMV) ,样品粗汁液稀释30 0倍 ,以及应用组织印迹法对采自云南曲靖市的花叶样品进行了TMV和CMV检测 ,并与电镜负染法的检测结果验证。表明两种方法都可以用来检测烟叶样品。组织印迹法比Dot ELISA法的操作简单 ,灵敏度高 ,适宜大量样品的常规检测