毕赤氏酵母醇氧化酶-2基因启动子突变体的分离和鉴定

巴斯德毕赤氏酵母表达系统已被广泛用于生产外源蛋白的奇主菌。利用该系统将外源基因整合交换到染色体上时，AOX1基因被破坏，使表达菌的甲醇利用缓慢，给发酵生产造成一定影响。在不改变现有表达系统前提下，从AOX1功能缺陷菌株分离出Mut+自发突变体。通过突变体在甲醇培养基中生长曲线的测定，HSA表达产物的聚丙烯酰胺凝胶电泳检测，证明突变体的甲醇利用能力和蛋白表达比原始菌株大大提高；突变体AOX2基因上游区域经PCR扩增进行全序列测定，结果表明在PAOX2阻遏蛋白结合区域－255和－529两个碱基发生改变，该突变改善了AOX1基因缺陷功能，有利于外源基因的高表达。