PCR结合寡核苷酸探针杂交检测临床常见真菌的实验研究

目的　建立PCR结合生物素标记的寡核苷酸探针斑点杂交技术 ,鉴定临床常见的真菌。方法　首先用真菌通用引物扩增白念珠菌、热带念珠菌、假热带念珠菌、近平滑念珠菌、光滑念珠菌、解脂念珠菌、克鲁斯念珠菌、季也蒙念珠菌、黄曲霉、烟曲霉的核糖体大亚单位基因的保守区序列 ,然后用生物素标记的种特异性寡核苷酸探针与扩增产物杂交。并将此方法用于临床标本和临床分离菌株的检测。结果　通用引物可以扩增上述 11种临床常见真菌的DNA ,扩增片段长度在 2 6 0bp左右。9种特异性探针分别与 11种真菌标准菌株的PCR扩增产物杂交 ,结果表明每种探针都具有高度特异性。斑点杂交法和Southern杂交法检测敏感性相同 ,为 10 0fg ;琼脂糖凝胶电泳法检测敏感性为 1pg。通过 6 9例临床标本和 31例临床分离菌株的检测 ,PCR 杂交法的结果和真菌培养法的结果基本一致。结论　PCR结合生物素标记的寡核苷酸探针杂交技术可将 9种临床常见真菌鉴定到种 ,方法快速、敏感、特异。