头状轮生链霉菌中丝裂霉素C抗性基因的克隆及功能研究

被引：4

作者：

黄健强

陆小燕

毛应清

杨蕴刘

焦瑞身

机构：

[1] 中国科学院上海植物生理研究所微生物次生代谢分子调控开放实验室!上海

[2] 中国科学院上海植物生理研究所微生物次生

来源：

微生物学报 | 1999年 / 06期

关键词：

头状轮生链霉菌; 丝裂霉素C; 抗性基因; 电穿孔; 丝裂霉素C产量;

D O I：

10.13343/j.cnki.wsxb.1999.06.003

中图分类号：

Q785 [转化及克隆];

学科分类号：

摘要：

头状轮生链霉菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍｃａｅｓｐｉｔｏｓｕｓ）ＡＴＣＣ２７４２２是抗肿瘤药物丝裂霉素的主要产生菌，实验通过诱变筛选获得不产生丝裂霉素同时对丝裂霉素Ｃ敏感的阻断变种Ｓ６，并以它为受体宿主，以质粒ｐＩＪ６９９为载体，建立野生型头状轮生链霉菌菌株ＡＴＣＣ２７４２２的基因库。采用鸟枪法克隆技术，从库中筛选获得含有丝裂霉素Ｃ抗性基因的６２ｋｂ外源片段的克隆子。将含此外源片段的质粒ｐＬＸ５导入变铅青链霉菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｌｉｖｉｄａｎｓ）获得表达。并且首次成功地运用电穿孔法将ｐＬＸ５导入野生型菌株中，使其对丝裂霉素Ｃ的抗性大幅度提高：最低抑制浓度（ＭＩＣ）由原来的２００μｇ／ｍＬ上升至１０００μｇ／ｍＬ以上。摇瓶发酵实验表明：单位菌量的ＡＴＣＣ２７４２２（ｐＬＸ５）的丝裂霉素产量高于野生菌株ＡＴＣＣ２７４２２，因此丝裂霉素Ｃ抗性与产量之间存在一定的相关性

引用

页码：495 / 502

页数：8

共 9 条

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