黄芪散含药血清对大鼠骨髓间充质干细胞增殖和分化功能的影响

目的观察黄芪散含药血清对大鼠骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells,BMSCs)增殖和成脂分化、成骨分化相关基因的影响,初探黄芪散对体内脂骨间代谢的影响。方法选用健康清洁级5周龄Sprague Dawley(SD)大鼠10只,随机分为正常饮食组和药物组。制备黄芪散含药血清和对照血清,选用健康清洁级4周龄SD大鼠4只,无菌条件下分离股骨与胫骨,剪开,以DMEM液冲洗骨髓培养BMSCs。采用细胞计数(CCK-8)法测定5%、10%、20%、40%含药血清对细胞增殖的影响,选取增殖较佳的5%、10%、20%血清剂量,采用实时聚合酶链反应(real-time PCR)法检测黄芪散含药血清对成骨功能基因骨桥蛋白(osteopontin,OPN)、骨钙素(osteocalcin,OC)、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、成骨分化相关基因核心结合蛋白因子2(runt-related transcription factor 2,RUNX2)和成脂分化相关基因过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferators-activated receptors,PPARγ)与成脂功能基因脂肪细胞脂结合蛋白2(activating protein 2,a P2)表达的影响。结果细胞增殖实验:与各自剂量空白血清组比较,5%、10%血清剂量组有明显升高(P<0.05,P<0.01)。基因测定结果:与空白血清组比较,5%、10%血清剂量组OPN、OC、ALP、PPARγ、RUNX2、a P2 m RNA表达都明显上调(P<0.01);20%剂量条件下,OPN、OC、ALP、a P2 m RNA表达都明显上调(P<0.01),PPARγ表达上调(P<0.05);且OPN表达随含药血清剂量增加而梯度上升,a P2表达随含药血清剂量的增加,血清对其表达的促进作用在梯度降低。其他基因均在10%血清剂量下表达值最高。结论黄芪散含药血清可促进BMSCs增殖及成骨、成脂分化相关基因的上调,对成脂代表基因a P2的促进作用会随剂量增加而降低。提示黄芪散含药血清随着剂量增大,促进BMSCs更多向成骨方向分化,成脂分化趋势减弱,其作用可能不是通过抑制PPARγ相关通路达到,机理待进一步研究。