H7N9病毒的M1基因序列分析及原核表达

被引：1

作者：

娄文静

张道军

史云

戚丽华

靳连群

刘雪林

宋宏彬

张传福

机构：

[1] 军事医学科学院疾病预防控制所

来源：

解放军预防医学杂志 | 2015年 / 33卷 / 03期

关键词：

流感病毒; H7N9; M1基因; 序列分析; 原核表达;

D O I：

10.13704/j.cnki.jyyx.2015.03.004

中图分类号：

R373 [人体病毒学（致病病毒）];

学科分类号：

100103 ; 100705 ;

摘要：

目的克隆H7N9禽流感病毒M1并在原核细胞中表达,为进一步研究其生物学特性、免疫学功能及血清学检测奠定基础。方法用PCR方法从禽流感上海分离株A/Shanghai/4664T/2013（H7N9）cDNA扩增M1基因,并克隆到载体pMD18-T中。经测序证实后,用EcoRⅠ/NdeⅠ双酶切,亚克隆到原核表达载体pET28a,并转化E.coli BL21（DE3）菌株。取工程菌,用IPTG诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE鉴定及western blot检验。结果（1）经PCR、测序和酶切鉴定,成功克隆了禽流感H7N9 M1基因;（2）经IPTG诱导的重组质粒pET28a-M1表达出约为28 k Da的融合蛋白,与预期结果相符;（3）对H7N9型禽流感M1基因序列分析表明,与2013年暴发的H7N9型禽流感病毒M1基因核苷酸序列同源性在95.4%100%,与2006-2011年间暴发的H7N9型流感病毒M1基因序列同源性在69.0%89.6%,2013年感染人的H7N9型流感病毒与此前暴发的该型流感分离株属于不同的进化分支。结论成功克隆了禽流感H7N9病毒的M1基因,并在E.coli中得以表达。

引用

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页数：4

共 7 条

[1]

Structure of a bi-functional membrane-RNA binding protein: influenza virus matrix protein M1. Sha B,Luo M. Nature Structural Biology . 1997

[2]

Molecular Cloning: A Laboratory Manual. Sambrook J,Fritsch EF,Maniatis T. . 1989

[3]

Characterization of the 1918 "Spanish" influenza virus matrix gene segment. Reid Ann H,Fanning Thomas G,Janczewski Thomas A,McCall Sherman,Taubenberger Jeffery K. Journal of Virology . 2002

[4] Influenza virus genetics [J].