随着转基因技术的发展及其在植物育种中的应用,出现了一大批表现优良、经济效益高的转基因植物,但生产实践要求一种植物同时具有多个优良的转基因性状。目前解决这一问题的方法主要是基因累集(Genepyramiding),就是将多个基因集中到同一植株,可以将已经转入1个基因的植株做原材料,用农杆菌介导或基因枪等方法将另一基因转进去。也可以采用人工杂交,在不同转基因植株之间进行人工授粉,从后代中筛选出所需要的基因型。本研究对抗苜蓿花叶病毒(AMV)的转基因红三叶和抗白三叶花叶病毒(WCMV)的转基因红三叶进行了人工杂交,以期获得兼有2个基因、同时抵抗2种病毒的新植株,为下一步的育种打好基础。几乎所有的杂交组合都结了种子,杂交一代的发芽率随杂交亲本转基因拷贝数的不同而有所变化,只有1个转基因拷贝的亲本其杂种发芽率最高。对所有幼苗先用PCR进行检测,从中挑出较理想的基因型作进一步的分子生物学分析。Southern和Northern印迹分析结果表明,有些杂交一代的转入基因多于1个拷贝,有一部分同时兼有2种抗病基因,并且得到了表达。为进一步检测其抗病性,对它们进行了温室接种和田间评估,结果显示,尽管有的个体Northern分析呈阳性,但在田间仍然对病毒敏感,不过其感病程度都比对照有显著降低。大多数兼有2种转