pIRES-PML-RARα-hIL-2重组质粒的构建和表达研究

被引：4

作者：

胡刚 ^{[1
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李扬秋 ^{[1
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周羽竝 ^{[2
]}

陈少华 ^{[1
]}

杨力建 ^{[1
]}

岑东芝 ^{[1
]}

机构：

[1] 暨南大学医学院血液病研究所

[2] 暨南大学医学院生化教研室

来源：

癌症进展 | 2008年 / 04期

基金：

广东省科技计划;

关键词：

PML-RARα; hIL-2; 急性早幼粒细胞白血病; DNA疫苗;

D O I：

暂无

中图分类号：

R73-3 [肿瘤学实验研究];

学科分类号：

100214 [肿瘤学];

摘要：

目的构建PML-RARα融合基因与人白介素-2(hIL-2)基因真核双表达质粒。方法利用RT-PCR技术从NB4细胞的RNA中扩增出PML-RARα融合点附近的部分基因片段,通过RT-PCR扩增Jurkat细胞中的hIL-2基因,并分别将两基因片段连接到pIRES质粒的多克隆位点(MCS)A和B中,构建真核双表达质粒。利用酶切和序列分析方法验证所构建质粒的正确性。将构建成功的重组质粒转染A549细胞,通过RT-PCR检测重组质粒在真核细胞中的转录情况,利用点杂交、ELISA检测目的蛋白的表达情况。结果NheⅠ/MluⅠ和SalⅠ/NotⅠ双酶切证明重组质粒中含有相应大小的PML-RARα基因片段及hIL-2基因,序列分析证明重组质粒中插入片段的碱基序列均完全正确。将所构建的pIRES-PML- RARα-hIL-2质粒转染A549细胞后经RT-PCR鉴定表明,插入到重组质粒中的PML- RARα和hIL-2基因能够在真核细胞中进行正常转录。经点杂交和ELISA检测显示重组质粒在真核细胞中可表达hIL-2蛋白。结论成功构建了pIRES-PML-RARα-hIL-2质粒,该重组质粒能够在真核细胞中正常转录并表达PML—RARα和hIL-2蛋白。

引用

页码：357 / 361+366 +366

页数：6

共 3 条

[1]

血液肿瘤免疫治疗学.[M].李扬秋主编;.人民卫生出版社.2005,

[2]

NB4和HL-60细胞诱导的脐血T细胞TCR Vβ基因谱系分析 [J].