胰岛素受体底物1和2敲低对猪肝脏细胞糖脂代谢的影响

被引：5

作者：

黄天晴 ^{[1
]}

孔庆然 ^{[1
]}

李妍 ^{[1
]}

于淼 ^{[2
]}

刘忠华 ^{[1
]}

机构：

[1] 东北农业大学胚胎工程实验室

[2] 哈尔滨职业技术学院

来源：

中国生物工程杂志 | 2014年 / 34卷 / 04期

关键词：

IRS1; IRS2; RNA; 干扰; 糖脂代谢; 猪;

D O I：

10.13523/j.cb.20140405

中图分类号：

R587.1 [糖尿病];

学科分类号：

100201 [内科学];

摘要：

目的:通过shRNA干扰高效敲低猪肝脏细胞中IRS1和IRS2基因的表达,进而验证其对于糖脂代谢相关基因表达的影响,为构建2型糖尿病模型猪奠定基础。方法:首先通过重叠PCR方法克隆了猪IRS1基因全部的mRNA序列(4 814bp)以及通过3'RACE方法克隆了猪IRS2基因的部分3'非编码区(3-untranslated region,3'UTR)。然后,通过Real-time PCR筛选获得了能显著敲低这两个基因的shRNA片段,并在同时敲低IRS1和IRS2的猪肝脏细胞中,检测糖脂代谢相关基因的表达。结果:猪肝脏细胞中IRS1和IRS2的表达被显著敲低,分别下降了78%和64%。另外,糖异生作用酶磷酸烯醇丙酮酸激酶(phosphoenolpyruvate carboxykinase,PEPCK)和果糖-1,6-二磷酸酶(fructose-1,6-bisphosphatase,F-1,6-BP)基因表达显著上升,并导致催化肝脏中糖酵解反应的葡糖激酶(glucokinase,Gck)基因表达的显著下降。同时,胆固醇调节元件结合蛋白(sterol regulatory element-binding proteins,SREBP-1)基因的表达也显著上升以及胆固醇调节基因Abcg8,CYP7a1表达明显上调。结论:猪肝脏细胞中IRS1和IRS2基因的敲低可激活糖异生作用,并抑制糖酵解反应,从而导致糖代谢的异常,同时也能引起脂类代谢的异常。

引用

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共 6 条

[1]

Establishment of a streptozotocin-induced diabetic domestic pig model and a systematic evaluation of pathological changes in the hard and soft tissue over a 12-month period [J].