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甲基对硫磷水解酶基因的克隆与融合表达

被引：13
作者：
刘智
洪青
徐剑宏
武俊
张晓舟
张小华
马爱芝
朱军
李顺鹏
机构：
[1] 南京农业大学生命科学学院微生物学系,南京农业大学生命科学学院微生物学系,南京农业大学生命科学学院微生物学系,南京农业大学生命科学学院微生物学系,南京农业大学生命科学学院微生物学系,南京农业大学生命科学学院微生物学系,南京农业大学生命科学学院微生物学系,南京农业大学生命科学学院微生物学系,南京农业大学生命科学学院微生物学系农业部农业环境微生物工程重点开放实验室,南京,农业部农业环境微生物工程重点开放实验室,南京,农业部农业环境微生物工程重点开放实验室,南京,农业部农业环境微生物工程重点开放实验室,南京,农业部
来源：
遗传学报 | 2003年 / 11期
关键词：
鸟枪法; 甲基对硫磷水解酶基因; 基因分析; 融合表达; 基因定位;
D O I：
暂无
中图分类号：
Q785 [转化及克隆];
学科分类号：
摘要：
利用鸟枪法从甲基对硫磷降解菌DLL 1Peudomonasputida)中克隆了甲基对硫磷水解酶基因 (mpd)片段2 5kb ,并进行了测序。通过软件分析开放阅读框和启动子序列 ,表明该序列中最可能为甲基对硫磷水解酶结构基因的阅读框为 76 9～ 1 794区域。软件分析还表明该水解酶前端 4 5个氨基酸为典型的信号肽结构。通过PCR扩增了mpd结构基因 ,亚克隆到表达载体pET 32a中 ,构建了完整的融合表达载体pET MP。转化大肠杆菌BL2 1 (DE3) ,在IPTG的诱导下 2～ 4h甲基对硫磷水解酶表达可以达到最高水平 ;同时还研究了乳糖的诱导效果 ,2 %乳糖诱导 2h就可以起到很好的效果。通过PCR反应验证了mpd基因定位于DLL E4的染色体而不是质粒上
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