聚合酶链反应同时检测五种腹泻致病菌的初步研究

目的探索一种快速、经济、敏感的诊断方法，对常见的腹泻致病菌进行基因检测研究。方法建立一种快速标本处理和多重聚合酶链反应（ｍｕｌｔｉｐｌｅｘＰＣＲ）诊断方法，在一次ＰＣＲ反应中同时扩增５种菌的致病基因：志贺菌及侵袭性大肠埃希菌的侵袭性质粒（ｉａｌ）基因、副溶血性弧菌的热稳定直接溶血素（ｔｄｈ）基因、Ｏ１群霍乱弧菌的霍乱毒素Ａ亚单位（ｃｔｘＡ）基因和产不耐热肠毒素大肠埃希菌的不耐热肠毒素Ｂ亚单位（ＬＴ－Ｂ）基因。扩增产物经电泳，出现与已知阳性对照细菌条带大小一致的条带即判断为该标本阳性。结果对一组常规培养生化鉴定法诊断为霍乱的２６份腹泻患者标本检测后，ＰＣＲ法有２４份检测到ｃｔｘＡ基因，ＰＣＲ阴性的２份为非Ｏ１群；另一组５６份粪标本分别检测到了ｉａｌ、ｔｄｈ、ＬＴ－Ｂ基因，ＰＣＲ法较培养法阳性率高。结论该方法具有简便、快速、特异、经济和不需培养等特点，适于临床应用。