K99—F41双纤毛菌的构建

产肠毒素大肠杆菌能引起仔猪、犊牛、羔羊等新生幼畜发生急性腹泻、K99和F41是这类产肠毒素大肠杆菌所产生的两种在免疫性质上不同的纤毛抗原。 提取K99质粒,用HindⅢ酶消化,再用低熔点琼脂糖电泳回收分子量约为11Md的K99的HindⅢ片段,并将该片段与经过碱性磷酸酶处理的PBR322载体重组,转化大肠杆菌C600。用ELISA筛选K99抗原阳性克隆。 E.coli83919F41+是非致病的产生F41纤毛抗原的野生菌株。且F41抗原基因是由染色体编码的。采用转化的方法将K99人工重组质粒转化到E.coli83919F41+中构建成K99—F41双纤毛基因工程菌。双纤毛菌中K99抗原表达达到给体菌的水平,而F41抗原的表达未受到明显的干扰。