玉米RAPD研究影响因素的探讨

以玉米开放群体为试材，对引物种类，复性温度，引物、ｄＮＴＰＳ、Ｍｇ＋＋、缓冲液、Ｔａｑ聚合酶浓度等因素对ＲＡＰＤ带型的影响进行了比较研究。结果表明，在不同复性温度下，有的引物在个体间扩增相同的带型，有的引物在个体间扩增不同的带型。同一引物高浓度比低浓度扩增信号强。高浓度ｄＮＴＰＳ比低浓度ｄＮＴＰＳ扩增效果差。低浓度Ｍｇ＋＋无扩增产物。高浓度Ｍｇ＋＋和高浓度聚合酶引起带纹模糊拖尾。高浓度缓冲液无扩增信号。双引物扩增可增加带数。根据以上研究结果，建立了适合玉米ＲＡＰＤ分析的技术体系：２５μｌ反应液中，含１倍缓冲液，１．５ｍｍｏｌ／ＬＭｇＣｌ２，０．２ｍｍｏｌ／ＬｄＡＴＰ，０．２ｍｍｏｌ／ＬｄＴＴＰ，０．２ｍｍｏｌ／ＬｄＣＴＰ，０．２ｍｍｏｌ／ＬｄＧＴＰ，０．８μｍｏｌ／Ｌ随机引物，１．５ＵＴａｑ酶，６０ｎｇ模板ＤＮＡ。