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植酸酶基因表达与调控机制研究(Ⅱ)──番茄幼苗cDNA文库构建与植酸酶基因筛选
被引：4
作者：
李明刚
刘迅
张敏
龚雪琴
郝亚桓
姬生健
机构：
[1] 烟台大学生物化学系
[2] 北京大学生命科学学院
来源：
关键词：
番茄,植酸酶,cDNA文库,克隆;
D O I：
10.13951/j.cnki.37-1213/n.1999.01.009
中图分类号：
Q946 [植物生物化学];
学科分类号：
071001 ;
摘要：
采用异硫氰酸胍法从发芽３～４ｄ的番茄幼苗中提取出总ＲＮＡ，用Ｏｌｉｇｏ（ｄＴ）纤维素亲和层析分离纯化ｍＲＮＡ．以ｍＲＮＡ为模板，Ｏｌｉｇｏ（ｄＴ）为引物用逆转录法合成双链ｃＤＮＡ．将ｃＤＮＡ与ＥｃｏＲＩ接头连接后克隆到表达载体λｇｔ１１的单一ＥｃｏＲＩ位点，经体外包装后感染宿主菌Ｙ１０９０，成功地构建了完整的番茄幼苗ｃＤＮＡ文库．用颜色筛选法筛选重组子，然后用植酸酶抗体做探针进行免疫筛选，得到两个阳性克隆．挑取阳性克隆噬菌斑扩增后纯化ＤＮＡ，经琼脂糖凝胶电泳鉴定，显示确有外源ＤＮＡ存在．该插入片断序列测定正在进行．
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