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家猪随机扩增多态DNA最佳反应体系的探讨
被引：9
作者：
任军
黄路生
高军
陈克飞
丁能水
林万华
罗明
机构：
[1] 江西农业大学动物科技学院
来源：
关键词：
猪；RAPD；反应体系;
D O I：
10.13836/j.jjau.1999065
中图分类号：
S828.2 [];
学科分类号：
090501 ;
摘要：
在研究江西地方猪种的遗传多样性及其系统分类时，对模板浓度和纯度、引物种类和浓度、ｄＮＴＰ浓度、镁离子浓度、温度转换时间以及双引物扩增等影响ＲＡＰＤ分析的因素进行了系统的探讨，在此基础上建立了适宜于本实验室研究的最佳ＲＡＰＤ技术体系：２０μＬ反应体系中，含１０ｍｍｏｌ／ＬＴｒｉｓ－ＨＣｌ，ｐＨ８．３，５０ｍｍｏｌ／ＬＫＣｌ，２．５ｍｍｏｌ／ＬＭｇＣｌ２，０．２ｍｍｏｌ／ＬｄＮＴＰ，０．４５μｍｏｌ／Ｌ随机引物，１．５ｕｎｉｔＴａｑ聚合酶，２０ｎｇ模板，０．５ｍｇ／ｍＬＢＳＡ。热循环参数为：９４℃预变性４ｍｉｎ，然后９４℃变性１ｍｉｎ，３６℃退火１ｍｉｎ，７２℃延伸２ｍｉｎ４０个循环，最后在７２℃延伸１０ｍｉｎ．ｓｌｏｐｅ为０．２。
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