内质网氧化还原酶1α表达下调对结肠癌细胞增殖、凋亡、迁移和自噬的影响

目的 :探讨敲减内质网氧化还原酶1α(endoplasmicreticulumoxidoreduclin1α,ERO 1α)基因表达对结肠癌细胞增殖、凋亡、迁移和自噬的影响,以及其潜在的作用机制。方法:利用TCGA(e Cancer Genome Atlas)数据库检索ERO1αmRNA在结肠癌组织中的表达情况;应用蛋白质印迹法检测结肠癌细胞株SW480、RKO、SW620、HCT116和HT29中ERO1α蛋白的表达水平。分别构建含ERO1α-shRNA的重组慢病毒(shERO1α组)及其对照(shCtrl组)并感染结肠癌RKO细胞,72 h后用荧光显微镜评估两组细胞的慢病毒感染效率;采用蛋白质印迹法检测病毒感染后细胞中ERO1α的表达水平;采用FCM法检测细胞凋亡,并用蛋白质印迹法检测凋亡相关分子的表达;用Cellomics细胞计数仪检测细胞增殖,并采用平板克隆实验检测细胞克隆形成能力;采用Transwell小室法检测细胞迁移能力;最后,采用蛋白质印迹法检测细胞自噬关键分子的表达。结果 :结肠癌组织中ERO1αmRNA表达水平明显高于相应的癌旁组织(P <0.001)。结肠癌RKO细胞中ERO1α蛋白表达水平相对最高。成功构建shERO1α重组慢病毒,其对RKO细胞的感染效率超过80%。与对照组shCtrl相比,shERO1α可有效敲减ERO1α基因的表达(P <0.01)。ERO1α敲减促使细胞凋亡率升高(P <0.05),Caspase-3表达水平上调(P <0.01),Bcl-2表达水平下调(P <0.01)。ERO1α敲减使结肠癌RKO细胞的增殖、克隆形成和迁移能力均明显降低(P值均<0.01)。ERO1α敲减细胞中自噬相关蛋白LC3和Beclin 1的表达水平明显升高(P值均<0.05),而P62蛋白表达水平明显下调(P <0.05)。结论 :ERO1α在结肠癌组织和细胞株中呈高丰度表达。ERO 1α基因敲减促进结肠癌细胞凋亡,抑制细胞增殖和迁移,并促使细胞自噬水平增高,表明ERO1α在结肠癌恶性进展中发挥重要作用。