携EGFP基因的逆转录病毒包装细胞的分选和滴度测定

被引：5

作者：

张银刚

郭雄

周京军

鱼兵

刘兵

机构：

[1] 西安交通大学医学院环境与疾病相关基因教育部重点实验室地方病研究所,西安交通大学医学院环境与疾病相关基因教育部重点实验室地方病研究所,第四军医大学基础部生理教研室,唐都医院中心实验室,唐都医院中心实验室陕西西安,陕西西安,陕西西安,陕西西安,陕西西安

来源：

第一军医大学学报 | 2005年 / 01期

关键词：

EGFP; 重组逆转录病毒载体; 荧光激活细胞分选技术; 基因转染;

D O I：

暂无

中图分类号：

R346 [];

学科分类号：

摘要：

目的探讨利用荧光激活细胞分选技术获得有效重组逆转录病毒包装细胞系的方法。方法用脂质体介导pLEGFP转染PA317细胞,用荧光显微镜观察转染结果;依据EGFP荧光利用流式细胞仪的分选技术获得多克隆和单克隆源性的包装细胞,并利用PCR、RT-PCR对其鉴定;以NIH3T3为靶细胞,对其滴度进行测定。结果荧光显微镜显示用脂质体介导的方法成功的转染PA317细胞,在4次连续流式细胞仪分选后得到了稳定表达的多克隆和单克隆源性的包装细胞。PCR和RT-PCR分别从多克隆和单克隆源性的包装细胞细胞基因组DNA以及多克隆和部分(6/8)单克隆源性的包装细胞培养上清中的重组逆转录病毒RNA中扩增出了插入的EGFP片段。滴度测定显示得到的包装细胞能够产生有效的病毒滴度。结论荧光激活细胞分选技术是获得有效病毒滴度的包装细胞的有效方法。

引用

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