鸟氨酸脱羧酶抗酶抑制因子-1高表达对小鼠黑素瘤B16-F1细胞增殖的影响

目的:研究鸟氨酸脱羧酶抗酶抑制因子-1(ornithine decarboxylase antizyme inhibitor-1,OAZI-1)高表达对小鼠黑素瘤B16-F1细胞增殖的影响。方法:采用巢氏PCR法从小鼠肝癌H22细胞cDNA中克隆出小鼠OAZI-1基因,并构建重组质粒pcDNA3.1(+)/OAZI-1。采用脂质体转染法将重组质粒转染入B16-F1细胞后,Western印迹法和实时荧光定量PCR法鉴定高表达OAZI-1的B16-F1细胞株。MTT法和FCM检测OAZI-1高表达对B16-F1细胞增殖和细胞周期的影响。反相高效液相色谱检测OAZI-1高表达对细胞内多胺水平的影响。化学发光法检测细胞内精胺氧化酶(spermine oxidase,SMO)的活性。结果:成功获得高表达OAZI-1的B16-F1细胞克隆株B16/over,该细胞中OAZI-1在mRNA水平的表达量是转染空载体质粒对照组细胞B16/3.1的3.6倍。B16/over细胞中,鸟氨酸脱羧酶抗酶(ornithine decarboxylase antizyme,OAZ)的mRNA表达水平降低,鸟氨酸脱羧酶(ornithine decarboxylase,ODC)的mRNA表达水平升高。高表达OAZI-1能促进B16-F1细胞增殖,并影响细胞周期,G0/G1期细胞减少而S期和G2/M期细胞增加。B16/over细胞中腐胺的含量明显增加,精脒和精胺的含量减少,而且SMO活性升高。结论:OAZI-1高表达可能通过增加细胞内腐胺含量,促进黑素瘤细胞增殖,提示该抑制蛋白可能成为黑素瘤治疗的一个潜在靶点。