高磷对血管平滑肌细胞骨钙素mRNA表达和钙沉积的影响

目的 观察高磷对培养的牛主动脉平滑肌细胞骨钙素(OC)mRNA表达和钙沉积的影响,探讨高磷是否为促进血管钙化的独立因素。方法 用不同磷浓度[正常组(Pi 1.5 mmol/L)、高磷组(2.0 mmol/L)]的培养液,培养牛主动脉平滑肌细胞,观察72 h骨钙素的表达,以及不同时间(第3、6、9天)血管平滑肌细胞的钙沉积。上清液中骨钙素浓度用放射免疫法测定。RT-PCR观察骨钙素mRNA的表达。平滑肌细胞钙含量用甲O-酚酞络合酮方法测定。BCA法测定蛋白含量,用蛋白含量标化骨钙素浓度和钙含量。结果 3d后与正常磷组相比,高磷组上清液骨钙素水平明显增高[高磷组(15.03±2.60)pg/μg蛋白比正常磷组(2.98±0.84)pg/μg蛋白,P<0.001];高磷组平滑肌细胞骨钙素mRNA的表达也显著增加(OC/GAPDH:1.91±0.13比0.75±0.04,P<0.001)。高磷组钙沉积显著增加[培养第6天,高磷组(77.19±11.69)μg/mg蛋白比正常磷组(25.77±1.75)μg/mg蛋白,P<0.01],呈时间和剂量依赖性。von Kossa钙染色,高磷组平滑肌细胞中见大量的黑色颗粒沉积。结论 高磷可直接刺激平滑肌细胞的钙沉积和骨钙素产生增加,促进血管平滑肌细胞钙化。高磷血症是促发血管钙化的独立因素。