尘螨Ⅱ类变应原Der f2和Der p2的DNA改组及生物信息学分析

目的构建尘螨Ⅱ类变应原Der f2和Der p2嵌合基因文库,并进行生物信息学分析。方法用PCR分别扩增Der f2和Der p2,扩增产物等量混合后用DNaseⅠ酶解;回收50～100 bp的片段,连续3轮无引物PCR,以Der f2基因的特异性引物进行有引物PCR,扩增片段连接于pUCm-T载体并转化E.coli DH-5α,随机挑取60个单菌落测序,应用生物信息学进行序列比对分析和抗原表位预测(包括T和B细胞抗原表位)。结果获得的10个重组子其编码蛋白不仅呈现新的Th细胞表位,也减少了B细胞表位。结论成功获得Der f2和Der p2嵌合基因文库,为后期筛选和制备高免疫原性和低变应原性的高效尘螨哮喘疫苗奠定了基础。