甲硒氨酸耐热邻苯二酚2,3双加氧酶的高表达和分离纯化

被引：8

作者：

季朝能

姜涛

殷长传

陈民勤

金詟

张志鸿

毛裕民

机构：

[1] 复旦大学遗传学研究所!上海,复旦大学生命科学学院,复旦大学遗传工程国家重点实验室

来源：

复旦学报(自然科学版) | 2000年 / 03期

关键词：

甲硒氨酸多波长反常散射法; 耐热邻苯二酚2,3双加氧酶; 表达; 纯化;

D O I：

10.15943/j.cnki.fdxb-jns.2000.03.093

中图分类号：

Q51 [蛋白质];

学科分类号：

070307 [化学生物学];

摘要：

甲硒氨酸多波长反常散射法是国际上 90年代发展的蛋白质晶体结构测定的新方法 ,该法得以实施的首要一步是获得硒取代 (硫 )的高纯蛋白质 .通过亚克隆将编码耐热邻苯二酚 2 ,3双加氧酶 (简称TCTD)的基因PHEB克隆至表达载体 pRSET ,得到了高表达质粒pRSET PHEB ,转入Met缺陷的菌株B834DE3.通过诱导表达和分离纯化得到了甲硒氨酸参入的TCTD .经质谱测定发现TCTD的所有 7个甲硫氨酸都被甲硒氨酸所替代 ,这为Se Met多波长反常散射法研究TCTD的晶体结构打下了基础 .

引用

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