缺氧血管内皮细胞Rho激酶信号通路活化与通透性的关系

目的探讨缺氧时血管内皮细胞Rho激酶信号通路活化与通透性的关系。方法 (1)将人血管内皮细胞株VE细胞接种于6孔板Transwell小室上,按随机数字表法分为对照组(未行缺氧处理)及缺氧1、2、3、6、12 h组(分别缺氧处理相应时间),每组5孔。用蛋白质印迹法检测细胞中Rho激酶Ⅰ、Ⅱ及肌球蛋白轻链磷酸酶靶亚单位1(MYPT1)、磷酸化MYPT1(p-MYPT1)、肌球蛋白轻链(MLC)、p-MLC的蛋白表达,计算p-MYPT1/MYPT1、p-MLC/MLC比值。(2)将VE细胞接种于24孔板Transwell小室上,按随机数字表法分为对照组(未行缺氧处理)与缺氧6 h组(缺氧处理6 h),每组5孔,用荧光分光光度计检测单层细胞通透性。对数据进行单因素方差分析或t检验,多组间两两比较采用Newman-Keuls法。结果 (1)对照组及缺氧1、2、3、6、12 h组细胞Rho激酶Ⅰ蛋白表达量分别为0.63±0.14及0.36±0.08、1.25±0.21、1.98±0.16、1.49±0.38、0.79±0.24(F=36.52,P<0.01),其中缺氧2、3、6 h组显著高于对照组(P值均小于0.01)。各组细胞Rho激酶Ⅱ蛋白表达量比较,差异具有统计学意义(F=17.84,P<0.01),其中缺氧2 h组为1.33±0.17,显著高于对照组的1.05±0.04(P<0.01)。对照组及缺氧1、2、3、6、12 h组细胞p-MYPT1/MYPT1比值分别为0.62±0.13及0.62±0.11、0.65±0.10、1.06±0.23、1.37±0.16、1.91±0.32(F=37.41,P<0.01),其中缺氧3、6、12 h组显著高于对照组(P值均小于0.01)。对照组及缺氧1、2、3、6、12 h组细胞p-MLC/MLC比值分别为0.72±0.19及0.83±0.17、0.91±0.15、1.39±0.16、2.02±0.15、0.90±0.25(F=36.92,P<0.01),其中缺氧3、6 h组显著高于对照组(P值均小于0.01)。(2)缺氧6 h组单层细胞通透性为36.1±8.0,显著高于对照组的9.1±2.1(t=7.30,P<0.01)。结论 Rho激酶信号通路活化可能参与了缺氧引起的血管内皮通透性增加的发生。