XAF1基因重组腺病毒载体的构建及其在人肝癌细胞体内外的表达

被引：3

作者：

孙璟 ^{[1
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朱黎明 ^{[2
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姚玮艳 ^{[3
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涂水平 ^{[3
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吴云林 ^{[3
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乔敏敏 ^{[3
]}

江石湖 ^{[3
]}

机构：

[1] 上海交通大学医学院附属瑞金医院老年科

[2] 上海交通大学医学院附属第三人民医院消化内科

[3] 上海交通大学医学院附属瑞金医院消化内科

来源：

国际消化病杂志 | 2012年 / 32卷 / 03期

关键词：

腺病毒载体; XAF1; 肝肿瘤; 构建; 表达;

D O I：

暂无

中图分类号：

R735.7 [肝肿瘤];

学科分类号：

100112 [医学生物化学与分子生物学];

摘要：

目的利用携带35型腺病毒纤毛的嵌合型5型腺病毒载体系统Ad5/F35构建XAF1基因重组腺病毒,体内外感染人肝癌细胞SMMC7721并使XAF1基因有效表达。方法将真核表达质粒pcDNA3.1-XAF1和穿梭质粒pDC316用BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切、筛选、测序获得重组穿梭质粒pDC316-XAF1。将测序正确的pDC316-XAF1和骨架质粒pBHG-fiber5/F35用Lipofectamine2000共转染HEK293细胞,进行细胞内同源重组,得到重组腺病毒Ad5/F35-XAF1。予终点稀释法测定重组腺病毒的感染滴度。用同样的方法得到携带增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的报告病毒Ad5/F35-EGFP。建立人肝癌细胞株SMMC7721裸鼠移植瘤模型,将Ad5/F35-XAF1和Ad5/F35-EGFP重组腺病毒分别感染人肝癌细胞株SMMC7721和瘤内注射;荧光显微镜观察EGFP在细胞和移植瘤冰冻切片中的表达;RT-PCR和Westrenblot法检测XAF1的mRNA和蛋白在细胞和移植瘤组织的表达。结果重组腺病毒Ad5/F35-EGFP感染肝癌细胞和瘤内注射后,予荧光显微镜均可见细胞和冰冻切片中呈现绿色荧光;Ad5/F35-XAF1感染肝癌细胞和瘤内注射后,XAF1mRNA和蛋白表达均显著高于对照组和报告病毒组。结论成功构建重组腺病毒Ad5/F35-XAF1和Ad5/F35-EGFP。该腺病毒载体可携带目的基因在人肝癌细胞株SMMC7721体内和体外进行有效表达。

引用

页码：172 / 175+183 +183

页数：5

共 4 条

[1]

Efficient gene transfer into normal human B lymphocytes with the chimeric adenoviral vector AD5/F35.[J].Daniel Jung;Sonia Néron;Mathieu Drouin;Annie Jacques.Journal of Immunological Methods.2005, 1

[2]

Gene transfer into human T lymphocytes and natural killer cells by Ad5/F35 chimeric adenoviral vectors [J].