虎杖苷诱导人脐带间充质干细胞向神经元样细胞分化过程中Notch信号通路的表达改变

目的:探讨虎杖苷联合生长因子诱导人脐带间充质干细胞(hUCMSC)向神经元样细胞分化的过程及Notch信号分子的表达。方法:体外分离培养hUCMSC。取第4代细胞,在不同剂量的虎杖苷和生长因子诱导下向神经样细胞分化。诱导后显微镜下观察细胞形态变化,应用细胞免疫荧光技术检测神经元特异性标志物3型β微管蛋白(β-tubulin-Ⅲ)的蛋白表达,荧光定量PCR法检测β-tubulin-Ⅲ、微管相关蛋白2(MAP2)、孤束核受体相关因子1(Nurr1)及Notch通路中Notch1受体蛋白和的靶基因发状分裂相关增强子1(hairy and enhancer of split 1,HES1)表达。结果:诱导后部分细胞胞体收缩变圆,折光性增强,突起变细增多,末端出现分支,呈典型的神经元样细胞。各诱导组的β-tubulin-Ⅲ、MAP2基因表达均高于对照组。β-tubulin-ⅢmRNA在低剂量和高剂量虎杖苷联合生长因子组高于单纯生长因子诱导组,MAP2 mRNA的表达在高剂量虎杖苷联合生长因子组最高。Nurr1 mRNA仅在高剂量虎杖苷联合生长因子组显著上调。细胞免疫荧光结果显示,低剂量和高剂量虎杖苷联合生长因子组部分细胞β-tubulin-Ⅲ表达阳性,单纯生长因子诱导组仅少量细胞表达β-tubulin-Ⅲ,对照组几乎不表达,与mRNA变化一致。Notch1和HES1的mRNA在高剂量虎杖苷联合生长因子组表达下调。结论:虎杖苷能够诱导hUCMSCs分化为神经元样细胞,并抑制Notch信号分子表达,且存在剂量依赖性。低水平的Notch信号激活可能有利于神经细胞的分化。