水稻cDNA文库的构建及巯基蛋白酶抑制剂cDNA的分离

被引：11

作者：

周兆斓

朱祯

刘春明

张海涛

肖桂芳

李向辉

机构：

[1] 中国科学院遗传研究所,中国科学院遗传研究所,中国科学院遗传研究所,中国科学院遗传研究所,中国科学院遗传研究所,中国科学院遗传研究所北京,北京,北京,北京,北京,北京

来源：

中国科学C辑:生命科学 | 1996年 / 02期

关键词：

水稻cDNA文库; 巯基蛋白酶抑制剂; 抗虫基因; 序列分析;

D O I：

暂无

中图分类号：

Q943 [植物细胞遗传学];

学科分类号：

071007 ; 090102 ;

摘要：

取开花后2周左右的水稻未成熟种子提取总RNA,分离mRNA,进而反转录合成cDNA并定向插入λgt22A克隆载体,经体外包装建成水稻未成熟种子的表达型 cDNA文库,经测定库容量达 1.5 × 10～6 Pfu.进一步人工合成水稻巯基蛋白酶抑制剂(Oryzacystatin)编码基因5＇-端保守的21Nt的寡核苷酸经末端标记作为探针,从 2.1×10～4Pfu中筛选出 9个阳性克隆,经鉴定其中 8个含有完整的水稻巯基蛋白酶抑制剂编码序列,对 1号克隆的序列分析表明,其除含有 309 bp的水稻巯基蛋白酶抑制剂编码序列外,在 5＇-端及 3＇-端还分别含有 84 bp和 497 bp的非编码序列,其中 3＇-端带有AATAAAA两个加尾信号以及31 Nt的Poly(A)尾,同水稻巯基蛋白酶抑制剂基因组序列比较,编码区碱基序列完全一致,但5＇-端和3＇-端非编码区有明显差异,其中加尾信号以后的cDNA碱基序列中含有大量的不连续插入.

引用

页码：149 / 155

页数：7