人关节软骨源性微载体的制备

目的制备一种既能大量扩增人软骨细胞,又能作为细胞支架的人关节软骨源性微载体。方法切取人关节软骨,冷冻干燥后粉碎,筛取150￣200!m的软骨颗粒,以质量分数为0.25%的胰蛋白酶37℃消化24h,加入体积分数为1%的TritonX-100振荡72h,在倒置相差显微镜下进行观察,并行HE、番红花O染色及软骨蛋白聚糖、Ⅱ型胶原免疫组化染色。将微载体经60Co照射灭菌后与人关节软骨细胞共同培养。结果倒置相差显微镜下可见关节软骨颗粒冻干后呈黄色,形状不一,可呈方形、多角形或不规则形,表面凹凸不平,可见多个陷窝。经胰蛋白酶和TritonX-100处理后,微载体呈淡黄色,关节软骨的基本形态消失,微载体绒毛化,呈绒球状或毛刷状,表面接触面积大幅度增加。微载体与软骨细胞在37℃培养箱中共同培养2h时即见大量软骨细胞黏附于关节软骨源性微载体上。HE染色显示已无软骨细胞成分;番红花O染色弱阳性,提示仍残留少许糖胺多糖;软骨蛋白聚糖免疫组化染色阴性,提示微载体内软骨蛋白聚糖已被敲除;Ⅱ型胶原免疫组化染色阳性,提示微载体内Ⅱ型胶原仍然存留。结论经胰蛋白酶和TritonX-100处理的关节软骨颗粒,不但脱去了软骨的细胞成分、敲除了软骨蛋白聚糖、使之呈绒球状或毛刷状、增大了表面接触面积,而且保留了对软骨细胞黏附、增殖和再分化起重要作用的Ⅱ型胶原和GAG,经与人关节软骨细胞共培养,证实关节软骨源性微载体与软骨细胞的体外相容性良好。