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正交法整体优化差异显示反应体系
被引：7
作者：
柳淑芳
杜立新
朱靖
王爱华
李宏滨
机构：
[1] 山东农业大学动物科技学院,中国农业科学院畜牧研究所,山东农业大学动物科技学院,中国农业科学院畜牧研究所,中国农业科学院畜牧研究所泰安国家水产品质量监督检验中心,青岛,北京,泰安,北京,北京
来源：
关键词：
DDRTPCR;
正交优化;
非变性PAGE;
银染;
反向Northern;
D O I：
10.16288/j.yczz.2004.06.012
中图分类号：
Q786 [基因的表达];
学科分类号：
摘要：
mRNA差异显示PCR(mRNAdifferentialdisplayPCR ,DDRT PCR)是分离差异表达基因的有效方法 ,但该方法的准确性极易受到外部因素和内部因素的影响。采用正交法优化DDRT PCR反应条件 ,充分考虑到模板浓度、锚定引物浓度、随机引物浓度、dNTPs浓度、镁离子浓度以及Taq酶用量等因素在差异显示反应过程中的交互作用 ,一次PCR反应即可确定最佳反应组合。将筛选出的条件用于DDRT PCR ,得到差显结果假阳性率低 ,重复性和稳定性好 ,而且简化了反应条件的优选程序 ,这表明正交法是优化差异显示反应条件的理想方法。为了进一步简化整个差异显示反应系统的操作程序 ,降低假阳性率 ,研究采用了非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳 (polyacrylamidegelelectrophoresis,PAGE)和银染显示差异带的方法 ,并用反向Northern法来验证回收条带 ,从而更加优化了差异显示反应体系
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页码：836 / 840
页数：5
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