经皮注射重组人转化生长因子β1促进骨折愈合的实验研究

目的运用基因重组的方法，对人转化生长因子β１（ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ　ｇｒｏｗｔｈ　ｆａｃｔｏｒ－β１）进行基因克隆，并在大肠杆菌中表达。同时观察其促进骨折愈合的作用。方法以 ｐＢＶ ２２０作为原核细胞表达载体，将 ＴＧＦ－ β１ｃＤＮＡ片段定向重组到 ｐＢＶ ２２０的多克隆位点上，构建原核细胞表达性质粒ｐＴＧＦ－ β１，并转化至大肠杆菌中进行温度诱导表达。制造兔桡骨骨折模型，经皮注射重组 ＴＧＦ－ β１，并与单纯挠骨骨折模型做对照。术后行Ｘ线和同位素骨显像检查。结果表达产物经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析，ＴＧＦ－β１原核表达体系可高效表达 ＴＧＦ－ β１，其表达产物占菌体可溶性蛋白的 ２３％。用大鼠肾成纤维细胞（ＮＲＫ细胞）进行活性检测，该方法生产的 ＴＧＦ－ β１具有该蛋白的野生生物学活性。术后 Ｘ线检查，实验组骨折愈合较对照组平均超前２周；同位素核素骨显像检查，实验组与对照组差异有显著性意义（ Ｐ＜ ０ ０５）。结论 ＴＧＦ－β１原核表达体系的建立，为 ＴＧＦ－ β１的生产提供了高效的表达工程菌，其表达产物能明显促进骨折愈合。