芍药苷对AGEs刺激下RAW264.7巨噬细胞TLR2/4通路的影响

目的探讨芍药苷（paeoniflorin,PF）对晚期糖基化终末产物（advanced glycation end products,AGEs）刺激下RAW264.7巨噬细胞TLR2/4通路的影响。方法 AGEs在不同时间点刺激RAW264.7巨噬细胞,使用不同浓度的PF预先孵育细胞干预刺激,以优化实验条件;后将巨噬细胞随机分为对照组（DMEM培养基）、牛血清白蛋白（BSA）组(200 mg·L-1BSA)、AGEs组(200 mg·L-1AGEs)、PF组(200 mg·L-1AGEs+10-5mol·L-1PF)及TLR2/4抑制剂组(200 mg·L-1AGEs+30 mg·L-1人氧化磷脂)。Western blot检测各组TLR2、TLR4、髓样分化因子（My D88）、p-IRAK1、β干扰素TIR结构域衔接蛋白（TRIF）、干扰素调节因子3（IRF3）、p-IRF3、NF-κB p-p65、NF-κB p65、iNOS、TNF-α、IL-1β和MCP-1蛋白表达,RT-PCR检测各组TLR2和TLR4mRNA表达,ELISA法测定各组细胞上清液中TNF-α、IL-1β及MCP-1水平。结果与对照组相比,AGEs能明显上调TLR2、TLR4、My D88、p-IRAK1、TRIF、IRF3、p-IRF3、NF-κB pp65、NF-κB p65、i NOS、TNF-α、IL-1β、MCP-1蛋白表达（P<0.01）及TLR2、TLR4 mRNA表达（P<0.01）,增加细胞上清液中TNF-α、IL-1β、MCP-1水平（P<0.01）;PF和TLR2/4抑制剂能明显下调AGEs诱导产生的效应（P<0.01）。结论 PF可通过抑制巨噬细胞TLR2/4信号通路而发挥抗炎作用,这可能为糖尿病肾病的治疗提供新的理论基础。