过氧化物酶增殖子活化受体-γ siRNA腺病毒载体的构建

被引：6

作者：

王义生 ^{[1
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张弛 ^{[1
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李月白 ^{[2
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赵国强 ^{[3
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王少华 ^{[1
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李振伟 ^{[1
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殷力 ^{[1
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刘宏建 ^{[1
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机构：

[1] 郑州大学第一附属医院骨科,河南省高等学校临床医学重点学科开放实验室

[2] 郑州大学基础医学院生物化学教研室

[3] 郑州大学基础医学院微生物学与免疫学教研室

来源：

郑州大学学报(医学版) | 2008年 / 03期

关键词：

RNA干扰; 过氧化物酶体增殖子活化受体-γ; 腺病毒载体; 克隆;

D O I：

10.13705/j.issn.1671-6825.2008.03.002

中图分类号：

Q78 [基因工程（遗传工程）];

学科分类号：

071007 [遗传学];

摘要：

目的:构建针对过氧化物酶体增殖子活化受体-γ(PPARγ)基因的siRNA腺病毒载体。方法:依据siR-NA设计原则,在PPARγmRNA(AF013266)序列中设计2个特异性靶序列(36-54、73-91),体外合成对应发卡样DNAs,退火后先将其克隆入pSIREN-Shuttle载体,再亚克隆入pAdeno腺病毒载体,对插入序列进行DNA序列分析。结果:发卡样siRNA单链DNA寡核苷酸退火后,电泳可见明亮靶条带。连接退火寡核苷酸和pSIREN-Shuttle载体得到阳性克隆pSIREN-Shuttle-siPPARγ-36、pSIREN-Shuttle-siPPARγ-73。同源重组后得到亚克隆pAdeno-siPPARγ-36、pAdeno-siPPARγ-73,测序证实插入序列与设计序列完全一致。结论:成功构建2个靶向PPARγ基因的siRNA载体pAdeno-siPPARγ-36和pAdeno-siPPARγ-73。

引用

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页数：3

共 5 条

[1]

RNA干扰技术的应用进展 [J].