血管活性肠肽真核表达质粒的构建及鉴定

被引：10

作者：

张松照

沈建根

廖志雄

潘建平

机构：

[1] 浙江大学免疫学研究所,浙江大学免疫学研究所,浙江大学免疫学研究所,浙江大学免疫学研究所浙江杭州,浙江大学医学院附属第二医院,浙江杭州,浙江杭州,浙江杭州,浙江杭州

来源：

浙江大学学报(医学版) | 2005年 / 02期

关键词：

血管活性肠肽; 质粒; 克隆,分子; 基因表达;

D O I：

暂无

中图分类号：

R346 [];

学科分类号：

摘要：

目的构建一种具有生物学活性的血管活性肠肽(VIP)的真核表达质粒。方法利用RT-PCR从小鼠胸腺淋巴细胞中克隆有信号肽序列的VIPcDNA,插入真核表达载体pcDNA3.1,构建含VIP的重组质粒pcDNA3.1-VIP,转染COS-7细胞,用ELISA和Westernblot鉴定表达的蛋白,细胞因子释放抑制法测定生物学活性。结果经酶切和基因测序证实,克隆的基因片段为带有信号肽序列的VIP基因;经转染的COS-7细胞表达VIP蛋白,并能有效地抑制巨噬细胞的TNF-α释放。结论成功构建了能够表达具有生物学活性的真核表达质粒pcDNA3.1-VIP。

引用

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