用酵母双杂交系统研究Smad3和Smad4的相互作用

Ｓｍ ａｄ３ 和 Ｓｍ ａｄ４ 是将 Ｔ Ｇ Ｆ β的信号从细胞外传递到细胞核内的重要的信号传导蛋白． Ｔ Ｇ Ｆ β与其受体结合后，激活受体的磷酸激酶，使 Ｓｍ ａｄ３ 发生磷酸化，活化的 Ｓｍ ａｄ３ 与 Ｓｍ ａｄ４ 结合，形成异源复合物，进入到核中．然后 Ｓｍ ａｄ４ 以 Ｄ Ｎ Ａ 结合蛋白的形式与特定的 Ｄ Ｎ Ａ 结合，将 Ｔ Ｇ Ｆ β的信号传到核内．激活转录，诱导背中胚层的形成，抑制细胞的分化等．经研究利用酵母双杂交试验，鉴定了 Ｓｍ ａｄ３ 和 Ｓｍ ａｄ４ 相互作用的功能区域．构建 Ｓｍ ａｄ３ 和 Ｓｍ ａｄ４ 的 Ｃ 端、 Ｎ 端和中间连接区的突变体，将这些突变体克隆到 ｐ Ｇ Ａ Ｄ４２４ 和 ｐ Ｇ Ｂ Ｔ９ 载体中，并转化到 Ｈ Ｆ７ Ｃ 酵母中．通过 Ｌｅｕ－ ／ Ｔｒｐ－ ／ Ｈｉｓ－ Ｓ Ｄ 平板上菌落的形成，和 Ｘ－ ｇａｌ显色反应鉴定转化到酵母中的两个克隆质粒的相互作用．结果显示 Ｓｍ ａｄ４ 与 Ｓｍ ａｄ３ 异源相五作用时，主要是通过 Ｓｍ ａｄ４ 的中间连接区．在同源作用时， Ｓｍ ａｄ３ 是通过 Ｃ 端，而 Ｓｍ ａｄ４ 是通过中间连接区进行的．