Elafin重组气道上皮细胞对铜绿假单胞菌生物被膜的抗菌作用

目的探讨Elafin重组气道上皮细胞对铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,Pa)生物被膜(biofilm,BF)的抗菌作用。方法体外平板法制备Pa生物被膜模型,用银染法及扫描电镜鉴定。体外培养A549细胞,将pEGEP-N1-Elafin重组到A549细胞,倒置荧光显微镜观察转染情况。采用猪胰弹性蛋白酶(NE组)、铜绿假单胞菌(Pa组)上清、大肠埃希杆菌(E．coli组)上清分别诱导孵育重组细胞24 h,另设转染未含Elafin基因空载体的A549细胞作为对照组。将成熟BF载体放入4组中继续孵育8 h,扫描电镜观察4组BF结构的变化,并于第8小时用四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定细菌存活数。结果扫描电镜下观察到3个诱导组的BF结构较对照组的BF明显松散,尤以Pa组和NE组为甚;NE组[(3．238±0．316)×106 CFU／cm2]、Pa组细菌数量[(3．317±0．247)×106 CFU／cm2]均较对照组[(5．946±0,453)×106 CFU／cm2]显著减少(P<0．01),E．coli组细菌数量[(5．138±0．391)×106 CFU／cm2]较Pa组和NE组减少,差异均有统计学意义(P<0．01)。3个诱导组BF细菌清除率与对照组相比分别为45．6％、44．2％和13．6％。结论Elafin重组气道上皮细胞能有效清除Pa生物被膜中的细菌,而Pa产物也是Elafin表达的有效诱导物。